Забытые имена

Исследования оплодотворения яйцеклетки in vitro  1955 год.

(факт истории)

« … Данные об оплодотворении и дроблении яйцеклеток в искусственных условиях говорят о возможности успешной трансплантации зародышей в матку после их культивирования в течение 2-3 дней вне организма.»

(Труды Крымского медицинского института, г.Симферополь 1957г. ) .

Литвинов В.В.

В.В.Литвинов

(клиника «Альтра Вита» г. Москва)

Сегодня появляются воспоминания отечественных первопроходцев, которые в 70-80-х годах первыми в СССР (России, Украине) проводили исследования по оплодотворению яйцеклетки человека вне организма, в условиях клиники. Это были четыре группы ученых независимых друг от друга, которые начали работы по оплодотворению яйцеклетки человека in vitro:

• А.И. Никитин, Э.М.Китаев – г.Санкт-Петербург

• В.И.Грищенко, Ф.В. Дахно – г. Харьков,

• В.М.Здановский, М.Б. Аншина – г. Москва

• Б.В.Леонов, Е.А.Калинина – г. Москва

Первую в СССР беременность in vitro получил Б.В. Леонов в 1986г.

Однако авторы практически не упоминают работы 1955г. нашего советского ученого Петрова Григория Николаевича из Крымского медицинского института (г.Симферополь). А если бы в те годы (70-х годах) с этими экспериментальными исследованиями и диссертацией Петрова Г.Н. («Процесс оплодотворения вне организма яйцеклеток некоторых млекопитающих животных и человека» 1959г.) они были знакомы, уверен мы бы первыми в мире решили этот вопрос на практике. Но сегодня мы отдаем дань великим англичанам Патрику Стептоу (Patrick Steptoe) и Роберту Эдвардсу (Robert Edwards) из Англии, у которых 25 июля 1978г. родилась первая девочка in vitro Луиза Браун (Louise Brown ).

Мы упустили свой шанс. Но изучать историю всегда полезно, хотя бы для того, чтобы не допускать в будущем подобных ошибок.

Из истории экспериментальных исследований оплодотворения яйцеклетки человека in vitro в мире в XX веке:

• … 1944г., Hamilton (США), ставя опыты по оплодотворению яйцеклеток человека вне организма, приводит данные только об образовании и выходе направительных телец в околожелточное пространство.

• …1944г. Rock, Minkin (США), после целого ряда неудачных попыток (проведено 800 опытов) в трех случаях наблюдали раздробившиеся вне организма яйцеклетки человека до стадии 2-х бластомеров (исследования были прекращены из-за многочисленных неудач)

Вот как описывает работы американцев, профессор Э.М. Китаев (первый акушер-гинеколог в СССР, начавший работу по применению на практике ЭКО в 70х годах в Санкт-Петербурге) в своих воспоминаниях «Из истории развития программы ЭКО в России» журнал Проблемы репродукции № 4-6 2002г.): « … В начале 40-х годов гинекологи из Гарварда Rock, Minkin … в течение четырех лет вели работу в США по оплодотворению яйцеклеток человека вне организма. Они даже опубликовали результаты своих исследований, но не будучи уверены в том, что получили истинное оплодотворение, отказались от своих, как они сочли, бесполезных усилий. Возобновили же работу американцы по этой проблеме лишь в 1978г.» (Американцы продолжили исследования, только после того, когда у англичан родилась первая девочка in vitro Луиза Браун (Louise Brown ) – замечание автора.).

• …1951г. – M.C. Chang (США) начинает разработку сред и условий для культивирования гамет и эмбрионов in vitro.

• 1953-1955г.г. – L. Shettles (США) наблюдал отделение направительных телец через 10-20 часов инкубации. Более поздних стадий оплодотворения и дробления яйцеклеток наблюдать не удалось. В 1955г. «… при культивировании яйца человека удалось в одном случае через 72 часа инкубации получить стадию морулы, состоящую из 32 бластомеров.» (из диссертации Г.Н.Петрова «Процесс оплодотворения вне организма яйцеклеток некоторых млекопитающих животных и человека» 1959г.)

• 1955-1957гг. – Г.Н.Петров (СССР) – исследовал последовательные фазы оплодотворения и дробления яйцеклетки человека вне организма.

• …1966г.– R.G. Edwards (Великобритания) установил, что созревание женских яйцеклеток in vitro происходит в течение 36-37 ч. после пика ЛГ».

Исследования Петрова Г.Н. в Крыму (1954-1955гг).

В 1954 году на кафедре гистологии Крымского государственного Ордена Трудового Красного Знамени медицинского института (г.Симферополь) молодой аспирант Григорий Николаевич Петров выполнял плановую научную диссертационную работу.

Он проводил исследования (1954г) на половых клетках млекопитающих животных по искусственному оплодотворению яйцеклеток in vitro и уже в 1955 году на половых клетках человека. Итоги работы были представлены в кандидатской диссертации «Процесс оплодотворения яйцеклеток некоторых млекопитающих животных и человека» (г.Симферополь, 1959 г.). В работу вошло описание 1100 опытов у млекопитающих (120 на свиньях, 9 на лошадях и 980 на кроликах) и 550 опытов на яйцеклетках человека. Г.Н. Петрову удалось выделить «из маточной трубы женщины бластулу, состоящую из 107 клеток».

Из диссертации Г.Н. Петрова:

«Методика исследования по оплодотворению яйцеклеток человека вне организма».

• Яичники брались у женщин во время оперативного вмешательства при различных гинекологических заболеваниях в лечебных учреждениях г. Симферополя.

• Обычно зрелые фолликулы в яичниках наблюдались у женщин…., когда операция производилась на ….14 день от начала менструального цикла. Зрелые фолликулы величиной до 1-1.5 см. заметно выступали на поверхности яичника.

• Для разбавления и сохранения спермы употреблялась специальная среда в которую добавлялось 5-6 капель проверенной семенной жидкости.

• При получении яйцеклеток яйцеклетка помещалась в бюкс с питательной средой, к которой затем добавлялось 2-3 капли разбавленной семенной жидкости (выделено автором)».

Профессор Э.М. Китаев в своих воспоминаниях «Из истории развития программы ЭКО в России (Как все начиналось… ) в 2007г. пишет:

«…И лишь после того, как по совету того же Эдвардса отделили сперматозоиды от семенной плазмы, а затем растворили осадок в новой порции среды, получили взвесь мужских гамет способных осуществить свою функцию в пробирке. Оказалось, семенная плазма губительно действует на женские половые клетки. Это была одна из первых неожиданностей, с которыми исследователи столкнулись в решении поставленной перед ними задачи».

А Г.Н. Петров разбавляя сперму специальной средой (лучшей оказалась смесь раствора Рингера с фолликулярной жидкостью) и добавляя 2-3 капли разбавленной семенной жидкости к полученной яйцеклетке человека, получал оплодотворение и деление, т.е. проблема «губительного действия «семенной плазмы» на женские половые клетки» была решена еще в 1955г.

Выводы, сделанные Г.Н. Петровым на основании изучения оплодотворения и первых стадий дробления яйцеклеток человека вне организма:

• Через 2 часа (после «осеменения») – по всей окружности прозрачной оболочки располагается большое количество сперматозоидов, отмечается рассеивание фолликулярных клеток лучистого венца.

• Через 4 часа – сперматозоиды обнаружены в ооплазме, в перивителлиновом пространстве выявляется одно направительное тельце.

• Через 12 часов – в протоплазме яйцеклетки четко выявлялось два ядра….Эти ядра почти одинаковы по размерам, но различны по форме….Первое ядро можно отнести к мужскому пронуклеусу, а второе к женскому.

• Через 18 часов – …наблюдалось последовательное слияние ядер. Через 20 часов … выявляется борозда дробления….справа и слева от борозды дробления в ооплазме видны два ядра. (Фото 1)

Фото1–из диссертации Г.Н. Петрова – Стадия слияния 2х пронуклеусов (18 часов наблюдения после «осеменения)

• Через 26 часов – стадия 2х бластомеров .…Каждая клетка (яйцеклетка) разделилась на два неодинаковые по величине и окраске бластомера…. В других яйцеклетках обнаружилась стадия 3х бластомеров.» (Фото 2 и 3).

Фото 2 – из диссертации Г.Н. Петрова – Яйцеклетка на стадии 2х бластомеров (26 часов).

Фото 3 – из диссертации Г.Н. Петрова – Другая яйцеклетка на стадии 3х бластомеров.(26 часов)

Профессор Э.М. Китаев в пишет:

«…существуют морфологические критерии истинного оплодотворения. Если спустя 6-8 часов после слияния гамет вы видите обломок хвоста спермия в цитоплазме ооцита, и образование одного или двух полярных телец, а несколько позже два ядра мужской и женский пронуклеусы, вы можете быть уверены, что сперматозоид проник в яйцеклетку».

Нет сомнений, что Г.Н. Петров видел и проследил последовательно именно стадии оплодотворения и дробления яйцеклетки человека in vitro в 1955г. (работы Петрова в институте получили тогда образное название «Крымская девочка»).

Есть свидетельство, о том, что в 1961г. в г. Ленинграде наш известный эмбриолог профессор, чл.-корр АМН СССР Павел Григорьевич Светлов принимал у себя итальянского «ученого» Д. Петруччи, который «показывал свои достижения в области оплодотворения яйцеклетки человека вне организма – 2х недельного эмбриона». На пресс-конференции, когда ему задали вопрос – «Кого Вы считаете своим предшественником?», доктор Петруччи ответил – «Конечно же Григория Петрова, советского ученого из Симферополя» (журнал «Техника молодежи» № 11, 1964г., стр.10 – «Жизнь до рождения»).

А вот как описывает итальянца Петруччи в своих воспоминаниях профессор А.И.Никитин (эмбриолог, руководитель Ленинградской группы ученых по исследованию оплодотворения яйцеклетки человека вне организма в условиях клиники, в 70-х годах в СССР): « Первым своеобразным толчком, вызвавшим интерес к этой проблеме, стал приезд в Ленинград итальянца Петруччи. Он стал известен, как исследователь, сумевший вырастить эмбрион человека вне организма. Достижения Петруччи выглядело невероятным. Когда он рассказывал о своем эксперименте в одной из аудиторий Ленинградского медицинского института, желающих послушать его собралось такое количество, что пришлось вызывать для поддержания порядка конную милицию. Аудитория была впечатлена лекцией итальянца. (из книги «История ВРТ в лицах», г. Москва, 2007г.).

А это высказывание, в то время директора Всесоюзного научно-исследовательского института акушерства и гинекологии МЗ СССР, академика АМН СССР Л.С. Персианинова: «Что касается Петруччи, то я не очень сильно склонен верить в его работы. Он не опубликовал ни одной научной статьи. Итальянские коллеги, у которых я интересовался, тоже не знакомы с его работами. Ну, а что касается выведения искусственных людей, я лично считаю, что вряд ли когда-нибудь человечество дойдет до этого»…

И как это ни парадоксально !!!! именно в этом институте в 1986г. Б.В. Леонов первым в СССР получил беременность in vitro.

Есть еще одно свидетельство, только не научное. Простые люди в небольшом городке нашей необъятной страны СССР (г.Симферополь, областной центр Крыма в 60-х годах) в статье « У ИСТОКОВ ЖИЗНИ» (газета «Крымская правда» от 10.01.1962г. (Фото 4) подробно описали успехи молодого ученого. А позже было опубликовано письмо женщины, после перенесенной операции по поводу 2-х сторонней тубэктомии, которая просила получить у нее яйцеклетки и оплодотворить их спермой мужа, чтобы перенести в полость матки эмбрионы. И это описано в провинциальной газете в 1962г., когда в мире никто об этом еще серьезно не думал.

фото 4-слева- проф. Хватов Б.П. зав. кафедрой гистологии, в центре Г.Н.Петров

Есть еще интересные факты:

• В середине 90-х годов из Германии вернулся бывший студент Г.Н. Петрова. Он восторженно рассказывал, что тамошние ученые воскликнули: «Так Вы из Симферополя? О, передавайте большой привет герру Петрову! Скажите, что мы помним его научные открытия по искусственному оплодотворению яйцеклеток человека». («Комсомольская правда в Украине» 10.01.1997г. « Впервые искусственного человека создали в Украине»)

• В 60-х годах на экскурсионных маршрутах троллейбусов, которые везли отдыхающих на Южный Берег Крыма, в устном разделе «наука Крыма» о Петрове вспоминали по нескольку раз в день. Задание было такое у экскурсоводов – напоминать, что и наши ученые не лыком шиты. (газета « Южная столица» 10.01.1997г. « Петруччи или Петров?Невыдуманная история забытой сенсации»)

• В 1962г. в Академии наук Грузинской ССР на заседании общества зоологов Грузии, был заслушан доклад к.м.н. Г.Н.Петрова на тему: «Процесс оплодотворения яйцеклеток млекопитающих животных и человека вне организма». В выписке из протокола №6 от 29.01.1962г. написано буквально следующее: «…. Данная работа имеет большое практическое и, несомненно, теоретическое значение. Факты, приведенные автором, считать достоверными. Заслушанный доклад Г.Н. Петрова вызвал большой интерес специалистов. Вокруг доклада возникла оживленная дискуссия. По мнению специалистов, данная работа заслуживает исключительного внимания и необходимо продолжение расширенных исследований в этом направлении.» (выписка из протокола №6 от 29.01.1962г. Академии наук Грузинской ССР на заседании общества зоологов Грузии).

Вот такая, как мне кажется, поучительная история об «истоках жизни», произошла в нашей стране в 50-х и начале 60-х годов XX века.

Признание своего открытия все-таки пришло при жизни ученого, хоть и слишком поздно, и далось оно непросто. Я приехал с докладом о работах по «Крымской девочке» на конференцию «10 лет ЭКО в России» (1996г. г. Москва). Б.В.Леонов, как председатель и юбиляр, той памятной конференции, сначала не дал возможности мне выступить с докладом о работах Г.Н. Петрова. Он сказал мне: « Я не хочу, чтобы на моей научной конференции говорили о «шарлатане» Петруччи». А в моем выступлении, конечно же, упоминание о нем было, т.к. именно Д.Петруччи считал своим предшественником Г.Н. Петрова. И таким образом, косвенно выходило, что и работы Петрова могут быть не совсем научные. А еще, конечно известное Б.В. Леонову, высказывание академика Л.С. Персианинова о Петруччи. И времени на конференции для изучения материалов работ Петрова не было (у меня тогда не было на руках диссертации Г.Н. Петрова). Но Б.В. Леонов был настоящий ученый, в первый день конференции взял мой доклад и уже в конце работы конференции пригласил к себе и сказал: « Я дам тебе слово, но в прениях по докладам, говори, то с чем приехал в Москву». Я выступил. Была дискуссия, если коротко, то: Б.В. Леонов сказал, что знаком с исследованиями Петрова, когда начинал работать по этой проблеме; Ф.В.Дахно (из Киева) слышал о работах Петрова; А.И. Никитин (из Санкт-Петербурга) от профессора, чл.-корр АМН СССР П.Г. Светлова, знает, что работы Петрова вызвали у него большие сомнения в их подлинности.

Я благодарен президенту РАРЧ, профессору В.С. Корсаку, который активно поддержал дискуссию и предложил наградить грамотой Петрова Г.Н. «За личный вклад в развитие экстракорпорального оплодотворения в России», которую вручили ему уже в г.Симферополе в стенах Крымского медицинского института. Григорий Николаевич Петров тогда сказал: «Я счастлив, что дожил до этих дней, когда вспомнили о моих исследованиях. Думал, что это случится только после моей смерти».

Выводы:

• Первые экспериментальные исследования оплодотворения яйцеклетки человека вне организма (in vitro) в СССР были проведены в Крымском медицинском институте (г. Симферополь) на кафедре гистологии (заведующий, профессор Б.П. Хватов) Григорием Николаевичем Петровым в 1955г.

• В 1957г. впервые в СССР и в мире группа советских ученых Крымского медицинского института сделала вывод: « … Данные об оплодотворении и дроблении яйцеклеток в искусственных условиях говорят о возможности успешной трансплантации зародышей в матку после их культивирования в течение 2-3 дней вне организма.» (Труды Крымского медицинского института, г. Симферополь 1957г. (стр.146)) .

• Открытия в науке проходят иногда длительный этап к их признанию. Не всегда комментарии, даже авторитетных ученых, становятся последней инстанцией в признании или нет этих достижений. Людям свойственно ошибаться. Только кропотливая работа, практика и еще раз работа помогают найти истину. А ВРЕМЯ всегда расставит точки на И…..

Мы должны помнить имена своих соотечественников, которые в разные периоды нашей истории работали на будущее. Григорий Николаевич Петров – один из них. И сейчас, когда современные методики искусственного оплодотворения многим людям помогли обрести счастье отцовства и материнства, мы знаем, что и наш соотечественник стоял у истоков нового направления медицины – оплодотворение яйцеклетки человека in vitro.

Москва (Россия) – Симферополь (Крым)

Справка:

Опубликованные работы по оплодотворению яйцеклетки человека вне организма учеными Крымского медицинского института..

«К вопросу об оплодотворении и дроблении яйцевой клетки человека»

Аспирант

Г.Н. Петров Тезисы доклада на научной сессии Крыммединститута, г.Симферополь 1955г.

(стр.14-15)

«Оплодотворение и ранние стадии развития зародышей млекопитающих животных и человека в сравнительном аспекте» Труды Крыммединститута, г.Симферополь 1957г.

(стр.146)

«Оплодотворение и первые стадии дробления яйца человека вне организма» Г.Н. Петров Архив анатомии, гистологии и эмбриологии,

Том ХХХV №1 1958г., г. Ленинград

«Процесс оплодотворения вне организма яйцеклеток некоторых млекопитающих животных и человека» Г.Н. Петров Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. г.Симферополь, 1959г.

«Сообщение о самом раннем зародыше человека in vitro» Б.П. Хватов,

Г.Н. Петров. Тезисы международного конгресса анатомов. Нью-Йорк, США, 1960г.

«Оплодотворение и ранние стадии развития зародышей млекопитающих животных и человека» Б.П.Хватов, Г.Н.Петров, В.А.Королев Труды Крыммединститута, г.Симферополь 1961г.

Том ХХХ (стр.3)

«Оплодотворение и ранние стадии развития зародышей млекопитающих животных и человека» Г.Н. Петров Тезисы докладов Всесоюзного съезда анатомов, гистологов и эмбриологов.

Тбилиси, 1966г.