Исследования оплодотворения яйцеклетки 1955 год.

Это первая статья Г.Н. Петрова исследования  оплодотворения яйцеклетки человека вне организма. Насколько человек был увлечен своей работой, что начав работу в 1955г., уже в мае 1957г. была написана статья, которую он направил в журнал  АРХИВ АНАТОМИИ, ГИСТОЛОГИИ И ЭМБРИОЛОГИИ в г. Ленинград. Вначале он проводит обзор литературы, что было сделано до него. И видно,  в мире было всего  2 статьи на эту тему: 1948г. и 1955г. в США.

Оригинальный  текст статьи  1957г.г

начало работ 1955 год.

ТОМ  XXXV АРХИВ АНАТОМИИ, ГИСТОЛОГИИ И ЭМБРИОЛОГИИ                   №1

ОПЛОДОТВОРЕНИЕ И ПЕРВЫЕ СТАДИИ ДРОБЛЕНИЯ ЯЙЦА ЧЕЛОВЕКА ВНЕ ОРГАНИЗМА.


Г. Н. Петров

Из  кафедры  гистологии  и эмбриологии  (зав. — проф.   Б. П. Хватов)  Крымского   го­сударственного медицинского института

Поступила в редакцию 4/V 1957 г.

Основные исследования по оплодотворению у млекопитающих проведены главным образом на лабораторных животных — мышах и крысах. Хорошо изучен этот процесс у кролика. В отношении сельскохозяйственных животных (коровы, свиньи, овцы) дан­ные об оплодотворении освещены в работах последнего времени (И. И. Соколовская, 1945; Б. П. Хватов, 1940—1954; М. Я. Соловей, 1945; А. В. Квасницкий, 1950; Г. А. Шмидт, 1951—1956; И. Г. Питкянен, 1955—1956, в др.).

Данные об оплодотворении и дроблении яйцевой клетки человека ограничены. Рокк и Минкин (1944) после целого ряда неудачных попыток (проделано 800 опытов) только в трех случаях наблюдали дробление яйцеклеток человека вне организма. Через 10 часов после осеменения наблюдалась стадия двух бластомеров. В этом же году Гамильтон (1944) сообщил о своих наблюдениях по оплодотворению яйца человека вне организма. На представленных микрофотографиях — срезах одного яйца показано отделение направительного тельца и его расположение в перивителлиновом пространстве. Шеттлз (1953) исследовал оплодотворение яйцеклеток человека вне организма. Наблюдения проводились прижизненно с помощью фазово-контрастного микро­ скопа. Яйцеклетки были получены из яичников и фаллопиевых труб у женщин во время операций. Автор отмечает, что сперматозоиды проходят через оболочку яйцеклетки в те­чение 18 минут. Отделение направительных телец происходит через 10—20 часов куль­тивирования. При этом не отмечалось различия в процессах оплодотворения между
яйцеклетками, добытыми из фолликулов и вымытыми из труб. Процесса оплодотворения
и дробления автор не наблюдал. Ему удалось видеть только процесс рассеивания лучисто­
го венца, проникновение сперматозоидов через прозрачную оболочку в перивителлиновое
пространство и образование направительных телец. В 1955 г., Шеттлз опубликовал данные о культивировании яйцеклеток человека вне организма в специальных чашках. В одном случае через 72 часа инкубации им была получена стадия морулы, со­стоящая из 32 клеток. Автор отмечает, что бластомеры неодинаковой величины и нахо­дятся в разных фазах деления.

Как видно из вышеприведенной литературы, в настоящее время имеются единичные данные только о стадиях дробления яйца человека. Последовательные фазы оплодотворе­ния до момента дробления не освещены. В 1955, 1956 гг. опубликованы наши первые ис­следования по дроблению яиц человека и жиеоткых вне организма. В настоящее время мы располагаем новыми данными, позволяющими сопоставить процесс оплодотворения яиц человека и животных вне организма с процессом оплодотворения, протекающим у мле­копитающих животных непосредственно в трубах (исследования Б. П. Хватова).

Первоначально методика наблюдений по оплодотворению и дроблению яиц у млекопитающих была нами разработана на яйцах кролика, свиньи и овцы.

Яйцеклетки добывались путем прокола зрелых фолликулов. Они помещались на предметные стекла с луночкой в различные питательные среды. Все операции произво­дились на нагревательном столике микроскопа в утепленной камере с соблюдением условий стерильности. Мы имели возможность наблюдать процесс оплодотворения и дробле­ния яиц кролика и свиньи. После этого были произведены исследования оплодотворения у человека. Яйцеклетки человека были получены из яичников, удаленных хирургическим путем при различных гинекологических заболеваниях. При этом учитывалась зрелость фолликулов.

Лучший эффект оплодотворения и дробления наблюдался при помещении яйцеклеток в специальные бюксы с питательной средой, состоящей из раствора Рингера (5 мм) и фол­ликулярной жидкости (0,5 мл) при температуре 38,5°. К питательной среде добавлялась одна капля проверенной семенной жидкости.

В различные сроки после осеменения яйцеклетки фиксировались в жидкости Карнуа, в 5% растворе формалина, в фиксаторе Навашина—Крылова. Яйцеклетки предвари­тельно окрашивались кармином и после заливки в парафин разлагались на серийные срезы толщиной в 10—20 U. Из каждой яйцеклетки получалось 8—10 срезов, которые докрашивались кармином или железным гематоксилином. Ставилась реакция Фёльгена.

Проникновение сперматозоидов через оболочки яйцевой клетки наблю­далось спустя 2 часа после осеменения.

Удалось наблюдать момент прохождения нескольких сперматозоидов в кортикальную часть цитоплазмы яйца (рис. 1). Сперматозоиды обнаруживаются между разрыхленными фолликулярными клетками.

Яйцо человека через 15 часов после осеменения. Рис. 4. Яйцо человека через 18 часов после Оплодотворение. Направительные тельца в осе­менения. Мужской (гомогенный) и перивителлновом пространстве. Мужской пронуклеус женский пронуклеусы расположен рядом. меньшего раз­мера, женский значительно круп­нее и располагается в центре яйца. Ядро яйцеклетки, как это было установлено на других срезах этой же клетки, находится у анимального полюса. В яйцеклетках через 4 часа после осеменения (рис. 2) обнаруживается много сперматозоидов, находящихся как в перивителлиновом пространстве, так и в цитоплазме клетки. У одних спермиев видны головка и хвост, у других обнаруживается только набухшая головка. Протоплазма яйцеклетки крупнозерниста, ядро расположено в центре.

На двух срезах одной яйцеклетки через 15 часов после осеменения (рис. 3) виден момент слияния мужского и женского пронуклеусов. В перивителлиновом пространстве заметны направительные тельца.

Яйцеклетка человека через 18 часов после осеменения (рис. 4) демонстри­рует один из моментов оплодотворения. Ядра яйцеклетки и сперматозоида лежат рядом. Оболочки яйцеклетки сохранены. Клетки лучистого венца рассеяны. Как видно из приведенных фотографий (см. рис. 2, 3 и 4), при оплодотворении ядра яйцевых клеток человека изменяют свои размеры и очертания, по-видимому, это связано с различным состоянием и распреде­лением   в   них   хроматина.

Спустя 20 часов после осеменения на одном из срезов яйца человека (рис. 5) видно появление первой борозды дробления. Оболочки клетки истончены.

рис. 5 Яйцо человека через 20 часов после осеменения. Образование первой борозды дробления. Видны 2 бластомера, 3-й бластомер частично скрыт направительными тельцами.

рис. 6  Яйцо человека через 26 часов после осеменения . Стадия 3 бластомеров. На срезе.

Перивителлиновое пространство увеличено, в нем видны набухшие сперматозоиды.

Через 26 часов после осеменения яйцо человека находится в стадии дроб­ления (рис. 6). Видны три бластомера различной величины. Один бласто­мер разделился, второй находится в состоянии митоза. Прозрачная обо­лочка яйцевой клетки  крайне истончена.

При постановке опытов мы имели возможность провести сравнение процесса оплодотворения и первых стадий дробления у человека с этими же процессами у животных как при осеменении вне организма, так и с про­цессами, протекающими в организме животных в трубах.

Первые стадии оплодотворения у человека и животных имеют большое сходство. У человека, так же как и у животных, при осеменении вне орга­низма в яйцо проникает много сперматозоидов, значительно больше, чем их обнаруживается в яйцеклетках, рассмотренных непосредственно в тру­бах, свернутых в улитку (исследования Б. П. Хватова).

При оплодотворении у человека наблюдаются более ярко выраженные изменения величины и структуры ядер яйцеклеток. При дроблении яйце­клетки человека выявляется быстрое истончение прозрачной оболочки. В яйце человека первая борозда дробления начинается так же, как и у млекопи­тающих животных, с анимального полюса, после 18 часов со времени прибав­ления семенной жидкости к среде, в которой находится яйцевая клетка.

ЛИТЕРАТУРА
КвасницкийА. В. Новое в физиологии размножения животных. Сельхозгиз, 1950.- Питкянен И.Г.  Некоторые закономерности овуляции, оплодотворения и  первых стадий эмбрионального развития у свиней. Изв. АН СССР, серия биологическая, 1955. — Петров Г. Н. Оплодотворение у млекопитающих животных и человека (тез. докл.  Научная сессия Крым.   мед. ин-та. Симферополь,   1956. — Соколовская И.И.  Анализ влияния числа сперматозоидов на оплодотворяемость и качество потомства.  Тр. Лаборат. искусств, осеменения животных (В. И. Ж.), т. 2, 1945. — Соловей М. Я. Влияние  числа сперматозоидов, вводимых при искусственном осеменении, на оплодот­воряемость и развитие плода. Тр. Лаборат. искусствен, осеменения животных (В. И. Ж-), т. 2, 1945. — Хватов Б. П. Оплодотворение и ранние стадии развития зародышей : сельскохозяйственных животных.   Крымиздат,  Симферополь,   1954.— Hamilton J, Journ. Of Anatomy, 78,1944.- Rock D. a. Minkin M. Sciense, 100,1944. – Shettels L.B. Observations on human follicular. Ova. Am. Journ. Obstetr. and Gynecol.., 66, № 2, 1953, – Shettels L.B. A morula stage of human ovum developed in vitro. Fertility fnd Sterility, 6, №4, 1955.
Адрес   автора: г. Симферополь, бульвар Ленина, д. 5/7,  Медицинский  ин­ститут, кафедра гистологии.